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植物原花青素試劑盒說明書-相關技術(shù)文章

更新時間:2025-02-17      瀏覽次數(shù):20


植物原花青素(Oligomeric Proantho Cyanidins, OPC試劑盒說明書

微量法 100T/48S

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義:

原花青素(Oligomeric Proantho Cyanidins,OPC是一類黃烷醇單體及其聚合體的多酚化合物,廣泛存在于植物的各種器官中,具有ji強的抗氧化性和清除自由基的作用,廣泛的應用于醫(yī)藥,食品,化妝品,保健品行業(yè)。

測定原理:

在酸性條件下,植物原花青素 A 環(huán)上的間苯二酚和間苯san酚與香草醛發(fā)生縮合反應,產(chǎn)生有色化合物, 500nm 處有特征吸收峰,測定 500nm 光吸收值可計算原花青素的含量。

組成:

 

產(chǎn)品名稱

BD6002-100T/48S

Storage

提取液:

60%乙醇,自備

4℃

試劑一:液體

8%鹽酸 10ml

4℃

試劑二:粉劑

1

4℃避光

說明書

一份

 

試劑二:粉劑 0.1g×1 瓶,4℃避光保存,臨用前加 10ml 甲醇溶解。測定工作液:臨用前按照用量將試劑一和試劑二按照 1:1 混合。

空白工作液:臨用前按照用量將試劑一和甲醇按照 1:1 混合。

 

自備儀器和用品:

天平、常溫離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96 孔板、蒸餾水、鹽酸、無水乙醇和甲醇。

OPC 提取:

稱取約 0.1g 樣本,加入 2ml 提取液,勻漿后,60℃振蕩提取 2h, 10000g25℃,離心 10min,取上清待測。

測定操作表

1、分光光度計/酶標儀預熱 30min,調(diào)節(jié)波長至 500nm,蒸餾水調(diào)零。

2、操作表


對照管

測定管

樣本μl

40

40

測定工作液μl


160

空白工作液μl

160


混勻,30℃水浴 30min,于微量石英比色皿/96 孔板中檢測 500nm 處吸光值,ΔA=A 

-A 對照,每個測定管設一個對照管。

 

OPC 計算公式:

a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下標準曲線:y=0.0194x+0.0006,R2=0.999

OPC 含量(mg/g 鮮重)= (ΔA-0.0006÷0.0194×V 反總÷(V ÷V 樣總×W)×10-3

= 0.515×(ΔA-0.0006÷W

V 樣總:加入提取液體積,2ml V 反總:反應總體積,0.2mlV 樣:反應中樣品體積,0.04mlW:樣品質(zhì)量,g

b.  96 孔板測定的計算公式如下

標準曲線:y=0.0097x+0.0006,R2=0.999

OPC 含量(mg/g 鮮重)= (ΔA-0.0006÷0.0097×V 反總÷(V ÷V 樣總×W)×10-3

= 1.03×(ΔA-0.0006÷W

V 樣總:加入提取液體積,2ml; V 反總:反應總體積,0.2ml;V 樣:反應中樣品體積,0.04mlW:樣品質(zhì)量,g

注意事項:

1、配制好的試劑二應盡快使用,4℃保存時間不超過一個月。

2、吸光度變化應該控制在 0.010.8 之間。否則加大樣品量或稀釋樣品,注意計算公式中參與計算的稀釋倍數(shù)要相應改變。

3、*低檢限為 10μg/g


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